Комплекс серологических реакций для диагностики сифилиса. Методы диагностики сифилиса

Реагиновые тесты используются для массового обследования пациентов на сифилис. Их обычно проводят в рамках профилактических осмотров. Такие тесты доступны в каждом лечебном учреждении и проводятся быстро. Ответ обычно готов спустя 30-40 минут.

Положительный результат при проведении реагиновых реакций не является критерием для постановки диагноза. Необходимо дополнительно провести видоспецифические исследования.

Самым распространенным скрининговым методом является реакция Вассермана. При ее проведении используются кардиолипиновый и трепонемный антигены. Если в сыворотке крови нет реагинов, то произойдет гемолиз эритроцитов барана, которые добавляются в качестве индикатора.

При наличии реагинов цельные эритроциты выпадут в осадок, в этом случае реакция считается положительной.

Реагиновые в следующих случаях:

другие заболевания, возбудители которых по антигенной структуре схожи с бледной спирохетой
беременность
онкологические заболевания
прием салицилатов
инфаркт миокарда
технические ошибки при проведении анализа

При положительном результате реагиновой реакции проводятся специфические серологические тесты. Также их назначает, если отрицательный результат вызывает сомнения.

Трепонемные антигены используются в таких анализах, как РИФ, РИТ, ИФА, РПГА, реакция гемадсорбции в твердой фазе. Эти реакции основаны на образовании комплексов антиген-антитело и различаются методикой их определения. Чаще всего используется реакция иммунофлюоресценции.

Препарат обрабатывается люминесцирующей сывороткой, что позволяет определить иммунные комплексы под люминесцентным микроскопом.

Одной из самых чувствительных серологических реакций, позволяющих диагностировать сифилис, является РПГА. Метод обладает высокой точностью. Его часто используется для верификации диагноза при беременности, когда другие анализы могут давать ложноположительный результат.

Особенности серодиагностики

Для проведения серологической диагностики сифилиса в разных его периодах производят забор крови из вены. Анализ рекомендуется проводить натощак, это снижает количество ложноположительных результатов. Пробирка должна быть стерильной. При проведении экспресс тестов в ряде случаев берут кровь из пальца.

При подозрении на для серодиагностики берут спинномозговую жидкость. Для ее анализа используются те же методики, что и при исследовании крови.

Для диагностики сифилиса пройдите полное обследование в нашей клинике.

Сифилис — довольно опасная патология, возникновение которой провоцируется проникновением в организм бледной трепонемы (Treponema pallidum). Заболевание опасное и при несвоевременной терапии или игнорировании проявлений, чревато критическими последствиями, в том числе летальным исходом.

Терапия венерического недуга продолжительная и трудоемкая. Своевременное выявление недуга и целесообразное лечение — оптимальный способ предупреждения развития осложнений, улучшения общего состояния и самочувствия. Прогноз будет благоприятным только в случае выявления сифилиса на ранних стадиях.

Патология коварна, характеризуется медленным и прогрессирующим течением. Обнаруживается зачастую случайно при прохождении обследования при подозрении на иной недуг, и поэтому зачастую выявляется поздно.

Поздние стадии болезни чреваты необратимыми и тяжелыми поражениями не только внутренних органов и систем, но и ЦНС. Человек может на протяжении длительного периода даже не догадываться о наличии заболевания и заражать партнеров. Риск инфицирования при интимной близости с зараженным — 30-35%. Продолжительность скрытого течения составляет примерно 1,5 месяца. Симптоматика недуга разнообразна и изменяется с прогрессированием патологии.

При появлении первой тревожной симптоматики — твердого шанкра на кожных покровах, необходимо в незамедлительном порядке обратиться за помощью специалиста и пройти обследование.

Не стоит пытаться самостоятельно вылечить недуг, это чревато непредсказуемыми последствию и чаще приводит к развитию осложнений. Сегодня существует много препаратов для терапии болезни, а также методов определения наличия в организме трепонем. Диагностирование патологии заключается в изучении анамнеза жизни, осмотре пациента, сборе анализов (биологического материала) и дальнейшего исследования жидкостей, в том числе крови, проведении серодиагностики. Также проводят дополнительные лабораторные исследования мочи, крови и биохимии крови.

Самый популярный и весьма эффективный способ — экспресс-тест на сифилис. Действие теста схоже по принципу с тестом на беременность. Единственное отличие — вместо урины используется кровь.

Достоинства метода исследования

Способ выявления сифилиса и его возбудителя пользуется спросом и в отличие от остальных методик обладает рядом преимуществ.

К основным из них относят:

Быстрый результат. Практически любой экспресс тест на сифилис дает результат в течение получаса. В некоторых случаях результата придется ждать несколько часов, но это все равно быстрее, чем исследование материала в лабораториях.
Цену. Приспособление в среднем стоит 300 рублей, что в разы дешевле диагностики в условиях лаборатории.
Возможность приобрести, как в любой аптеке, так и интернет магазине (анонимно).
Возможность проведения самостоятельно, в домашних условиях.
Простоту и доступность. Для прохождения теста не нужно особых знаний и умений. Все что нужно сделать — ознакомиться с аннотацией и при прохождении теста придерживаться всех рекомендаций.
Анонимность. Для проведения исследования нет надобности в посещении медучреждения. Не нужно оставлять контактную информацию.

Показания

Провести исследование может каждый желающий.

Но чаще всего проведение экспресс-теста на сифилис рекомендовано:

во время вынашивания плода;
в случае возникновения тревожной симптоматики;
при отсутствии возможности диагностирования в медучреждении;
людям, которые часто меняют половых партнеров;
тем, кто страдает иными половыми инфекциями;
перед тем, как сдать кровь (донорство);
при близком бытовом контакте с зараженным;
людям, которые по каким-то причинам не пользуются методами контрацепции;
если был незащищенный половой контакт.

Подготовительный этап и порядок выполнения исследования

С целью получения достоверного результата, экспресс-тест на сифилис следует проводить с учетом нескольких правил.

Категорически не рекомендуется за один-два дня до исследования пить спиртные напитки.
За тридцать минут до анализа следует отказаться от курения.
Тест необходимо проводить натощак и предпочтительно до обеда.
Перед проведением необходимо тщательно изучить инструкцию.

Несоблюдение этих рекомендаций чревато искажением результата. Проводится тест очень просто. Никакими особыми навыками и умениями обладать не нужно. Для начала следует хорошо вымыть руки (желательно мылом, обладающим антибактериальными свойствами). Нельзя проводить процедуру, если тест был только что куплен, и он еще не нагрелся до комнатной температуры (зимой, к примеру). Вскрывать упаковку следует только после окончания подготовки.

Чтобы полоска, которая уже извлечена, лежала на горизонтальной и ровной поверхности. К тому же она должна быть чистая и сухая.

Перед исследованием палец протирают спиртовой салфеткой (ее внутренней стороной). После прокола верхней фаланги скарификатором, каплю крови, которая выступит, следует набрать в пипетку и выдавить в ячейку индикатора. Далее в ячейку добавляется реагент — пара капель. Приблизительно по истечении четверти часа можно узнать результат. Если результат появился на индикаторе позднее (более чем через полчаса), считать его верным не рекомендовано.

Принцип работы

Работа теста схожа по принципу с тестом для определения беременности. Только вместо урины используется кровь. Результат будет зависеть от вида приспособления и правильности проведения процедуры.

Анализ крови РПГА: виды и эффективность тестов, достоверность результата и стоимость

Различают несколько разновидностей тестов. Они могут быть трепонемными и нетрепонемными. Первые являются очень специфическими, потому отсеивание здоровых людей происходит тщательно. Единственный их недостаток — пониженная чувствительность на ранних стадиях.

Анализ крови РПГА (расшифровывается аббревиатура, как реакция пассивной гемагглютинации) — специфический тест. Заключается метод в склеивании красных кровяных телец, на поверхности которых скапливаются антигены возбудителя. Подобная реакция происходит при добавлении крови инфицированного, которая содержит антитела к спирохете.

Что касательно чувствительности анализа крови РПГА и подобных тестов, в частности РИФ, то на ранних стадиях она составляет порядка 70-80%, на более поздних — 99%.

Анализ крови РПГА — далеко не единственный качественный метод, позволяющий определить болезнь. Не менее эффективным является ИФА. При помощи иммуноферментного анализа можно выявить антиген и антитела к ним, возбудителей самых разных инфекционных недугов. ИФА — это и скрининговый и подтверждающий способ одновременно. Этот метод способствует выявлению любой половой инфекции, а также сифилис на любом этапе его развития.

Применение нетрепонемных тестов

Помимо трепонемных тестов, в частности анализа крови РПГА выделяют еще и нетрепонемные. Такие приспособления способствуют обнаружению в сыворотке антител к фосфолипидам, разрушающимся из-за недуга. Подобные приспособления стоят дешевле, чем трепонемные. Для их проведения используется не белок-антиген (являющийся специфическим для трепонемы), а его альтернатива (кардиолипиновый антиген).

Из-за высокой чувствительности результат исследований часто ложноположительный. Применение таких тестов рекомендовано при массовом скрининге населения. Если же возбудитель выявлен, проводится повторная проверка, но уже с применением трепонемного теста.

Характеристики самых эффективных тестов

Сегодня существует много тестов для определения венерической патологии.

К самым точным и проверенным относят следующие виды:

Креатив МП-сифилис. Высокоэффективный и чувствительный тест (99%) с наличием двойной комбинации антигенов. Определяет антитела к возбудителю сифилиса, как в крови, так плазме и сыворотке. Для проведения исследования используется пара капель цельной крови. Результат можно узнать по истечении десяти минут. О наличии в организме трепонем будет сигнализировать появление двух розово-фиолетовых полос. Если в области контроля есть только одна полоска — человек здоров.
Cito Test Syphilis. Этот тест является иммунохроматографическим. Оснащен тест кассетой, буфером, пипеткой. Все остальное нужно докупить. Примерно через десять минут после анализа можно узнать результат. Наличие двух четких линий сигнализирует о наличии патологии.
ИммуноХром — антиТР-Экспресс. Выявляет антитела к возбудителю сифилиса. Результат можно узнать по истечении четверти часа. Об инфицировании сигнализирует появление двух фиолетовых полосок. В комплект входят: буфер, спиртовые салфетки, пипетка, тест полоска, скарификатор.
Сифилис-тест. Набор реагентов способствует определению антител к трепонеме способом ИХА (иммунохроматографического анализа). Наличие двух параллельных полос свидетельствует о наличии сифилиса. Результат можно узнать через десять минут.
Профитест. Тест с чувствительностью в 99.5%. В комплекте: тест кассета, ланцет, пипетка, спиртовые салфетки. Результат будет известен по истечении четверти часа. Наличие двух полос сигнализирует об инфицировании.

Следует знать

Зачастую результаты исследований точные. Ложным или недостоверным результат может быть из-за неправильного проведения процедуры.

Причины ложноотрицательного результата

Ошибочный результат теста на сифилис может быть обусловлен:

истекшим сроком годности;
приемом антибактериальных препаратов;
расшифровкой результата позже рекомендуемого времени;
неправильным хранением полоски;
проникновением посторонних жидкостей;
отсутствием на время исследования антигенов;
неправильным забором крови;
пониженной температурой теста;
вскрытием теста за три и более часов до исследования;
малым количеством биологической жидкости.

Причины ложноположительного результата

Невзирая на отсутствие патологии на момент исследования, вероятность получения ложноположительного результата имеется. Это может быть обусловлено: беременностью, наличием диабета, добро- или злокачественных опухолей, пневмонии, аутоиммунных патологий.

Помимо этого, ложный положительный результат может быть спровоцирован:

невенерическими трепонематозами;
преклонным возрастом;
наличием туберкулеза;
корью;
лептоспирозом;
наркоманией;
алкоголизмом.

Прежде чем ставить себе диагноз или опровергать его, пациенту следует обратиться к венерологу.

Цена, как хранить тест

Средняя стоимость экспресс-теста — 300 рублей. Хранить тест нужно герметично упакованным, при температурном режиме до 30 градусов. Заморозке тест не подлежит.

Российский национально исследовательский медицинский университет им. Н.И.Пирогова

Кафедра дерматовенерологии педиатрического факультета

Доклад на тему: Лабораторные методы диагностики сифилиса

Выполнил: Студент 440 в группы

Педиатрического факультета

Серанов Игорь Анатольевич

Нетрепонемные исследования

Трепонемные исследования

Комплекс проведения серологических реакций

Реакция Вассермана

Реакция иммунофлюоресценции

Реакция имунного прилипания

Реакция иммобилизации бледных трепонем

Реакция иммунофлюоресценцией адсорбцией бледных трепонем

Реакция гемагглютинационная

Иммуноферментный анализ

Полимеразная цепная реакция

Все серологические методы исследования, которые применяются на сегодня, условно разделяются на два вида: нетрепонемные , отборочные (НТТ)- и трепонемные , которые подтверждают наличие возбудителя (ТТ).Сифилис протекает очень сложно, клиника очень смазана и не всегда проявляется, поэтому для постановления правильного диагноза используют сразу несколько серологических тестов. При визуалированном подтверждении присутствия во взятом материале бледной трепонемы (при помощи микроскопа) диагноз ставится сразу же, и остальные тесты проводятся редко.

Нетрепонемные исследования (тесты) - НТТ - это так называемые отборочные исследования, они не очень дорого стоят и при их помощи можно обследовать достаточно большое число пациентов, к тому же результаты при многих тестах готовы очень быстро. Но при ложном течении заболевания, при низкой чувствительности проведение таких тестов нецелесообразно, 100%-ный результат получить не удастся.

При проведении нетрепонемных тестов в материале, который исследуется, обнаруживаются антитела, которые реагируют с кардиолипин - лецитиновым антигеном . Одним из первых тестов был метод, основанный на иммунологической реакции Борде - Жангу, где в качестве антигена выступал экстракт печени новорожденного ребёнка, который умер от сифилиса. На сегодня при проведении таких тестов антигеном выступают лецитин, холестерин и кардиолипин .

За границей, в частности в США используют 4 нетрепонемных метода, которые делятся на два вида: методы, которые позволяют визуально определить результаты реакции (RPR и TRUST) и методы микроскопического считывания результатов(USR и VDRL).

К нетрепонемным методам диагностики относится непрямой иммуноферментный анализ с использованием кардиолипина в качестве антигена. У нас в стране и в странах СНГ в качестве нетрепонемных тестов выступают реакция плазмы с инактивированной сывороткой (МР) и реакция, при которой происходит связывание комплимента с кардиолипином (РСК) .

Все методы нетрепонемной диагностики очень похожи друг с другом. У них у всех невысокая стоимость, их просто и быстро провести. Эти виды тестов не подходят при выявлении заболевания на первичной стадии и при сифилисе, который протекает скрытно (латентная форма сифилиса). Антитела, которые определяются нетрепонемным тестом появляются, где то через месяц после инфицирования трепонемой. В большинстве случаев у больных, которые лечили первичную стадию сифилиса, примерно около года нетрепонемные тесты имеют отрицательный результат.

Трепонемные исследования (тесты) - ТТ стоят намного дороже, техника проведения их очень сложная и они используются для подтверждения положительных результатов, которые были получены при нетрепонемных исследованиях.

Как мы говорили выше трепонемные методы применяют для того, чтобы подтвердить наличие бледной трепонемы в организме, которое было выявлено при помощи нетрепонемных тестов. Так же их проводят, если проводимые анализы так и не дали положительного результата, но клиника предполагает наличие заболевания. После полного излечения сифилиса более чем у 80% вылечившихся наблюдается положительная реакция при проведении трепонемных тестов ещё несколько лет, а у некоторых - всю жизнь. Исходя из этого трепонемные тесты не используют для профилактических осмотров у людей, которые прошли полный курс лечения.

Научные исследования в области иммунологии и молекулярной биологии продолжаются постоянно и при помощи новейших технологий появляются всё новые тесты для диагностики сифилиса, которые прочно занимают лидирующие позиции. Один из таких тестов, который прочно вошёл в практику - иммуноферментный анализ (ИФА) , а многие исследовательские методы находятся на стадиях разработки.

Тот комплекс проведения серологических исследований , который проводят в России включает в себя комплексное проведение серологических реакций:

стандартных серологических реакций –

реакцию связывания комплемента(реакция Вассермана),

реакцию с трепонемным антигеном и реакцию с кардиолипином;

груповых трепонемных реакций-

реакцию иммунофлюоресценции (РИФ)

реакцию иммунного прилипания(РИП);

видоспецифических протеиновых трепонемных реакций –

реакцию иммобилизации трепонем(РИТ),

РИФ - абс и её варианты (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS),

реакцию пассивной гемаглюцинации трепонем(РПГА).

Если серологические реакции использовать в комплексе, это даст возможность выявить заболевание на ранних этапах заболевания.

Реакция Вассермана - это метод связывания комплемента. Для проведения реакции в качестве антигена используют экстракты, которые изготавливаются из бледных трепонем (специфические антигены) и кардиолипин - это экстракт приготовленный из сердечной мышцы быка(неспецифические антигены). Чем больше в исследуемом материале наблюдается бледных трепонем, тем больше степень заболевания и оценивают степень плюсами:

1) - отрицательная; 2) + сомнительная; 3) ++ слабоположительная; 4) +++ положительная; 5) ++++ резкоположительная.

Реакцию Вассермана (Реакция связывания комплемента) в обязательном порядке проводят вместе с осадочными реакциями – Закс - Витебского и Кана. Иммунологическая природа реакций, в общем- то такая же, как и у реакции Вассермана, но для этих реакций требуются более насыщенные антигены, которые при вступлении в реакцию с реагинами сыворотки дают больший осадок. Серонегативный первичный сифилис ставят, если стандартные серологические реакции дали отрицательный результат. Выявление сифилиса реакцией Вассермана эффективно при серопозитивном вторичном сифилисе, здесь результаты теста на 100% верны . На третичной стадии активного сифилиса результаты верны у более половины больных, а на последних стадиях сифилиса, при поражении внутренних органов и систем, результаты верны у половины больных. У больных ранним врождённым сифилисом серологические реакции дают положительный результат почти всегда , а у больных с поздним врождённым сифилисом - почти в 80% случаев.

Принцип РСК заключается в том, что реагины, находящиеся в сыворотке крови больных сифилисом, обладают свойством вступать в соединения с различными антигенами. Образовавшиеся комплексы сортируют введенный в реакцию комплемент. Для индикации комплекса реагины–антиген–комплемент используется гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой). При наличии комплекса эритроциты выпадают в осадок. Что заметно не вооруженынм глазом. Выраженность гемолиза обозначается врачом ключами: резко положительная 4+, положительная 3+, слабоположительная 2+ ли 1+ и отрицательная. Кроме качественной оценки этих реакций имеется и количественная, имеющая значение в диагностике некоторых стадий сифилиса и при контроле за эффективностью терапии

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) основана на выявлении антител, которые метят специальным флуоресцентным раствором, для того, чтобы в фиолетовых лучах кварцевой лампы выявить соединённые с антигеном антитела. Эта реакция имеет высокую чувствительность и помогает выявить заболевание на первичной стадии серонегативного сифилиса. Так же именно этот тест помогает выявить заболевание у пациентов, у которых заболевание протекает латентно или на поздних стадиях. Существует несколько типов таких реакций и наиболее высоко ценится РИФ-200, при помощи, которой можно выявлять скрытый сифилис и распознать неспецифические результаты КСР. Но, несмотря на высокие показатели РИФа-200, постановка диагноза происходит после проведения всех клинических анализов. РИФ не подходит для наблюдения за пациентами после проведения полного лечения , так как достаточно медленно негативируется на этапе проведения лечения.

Реакция иммуного прилипания (РИП) . В основе этой реакции лежит прилипание трепонем, которые сенсибилизированны сывороткой, к эритроцитам и выпадение их в осадок. Результаты оцениваются по следующей таблице:

Отрицательная- 0-20%

Сомнительная-21-30%;

Слабоположительная-31-50%;

Положительная-51-100%.

По всем показателям РИП очень похожа на РИФ и РИТ. Эта реакция проводится в нескольких случаях, если на основании клинических проявлений, анамнеза, лабораторных исследований сифилис не подтверждается, для контроля за заболеванием после получения необходимого лечения и для подтверждения результатов КСР.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ) .Попав в среду, где есть иммобилизины испытуемой сыворотки и активный комплемент, бледные трепонемы теряют подвижность. На этом и основывается эта реакция. РИТ очень специфична и применяется для распознания скрытого сифилиса, для диагностики беременных, у которых подозревают сифилис и многих других случаев, при которых стандартные серологические тесты мало специфичны. Большой недостаток этой реакции то, что она стоит очень дорого и её проведение - очень сложный процесс. Результаты считываются по процентным данным иммобилизации бледных трепонем:

Отрицательная - до 20%; -сомнительная -21-30%; -слабоположительная -31-50%; -положительная -51-100%.

В связи с тем, что иммобилизины появляются в крови позже других антител, реакция становится положительной немного позже, чем при проведении других реакций. На первичном этапе инфицирования, как правило, наблюдается отрицательная или слабоположительная реакция. На вторичном этапе сифилиса, хотя появление иммобилизинов в сыворотке крови у больного наблюдается до 60%, реакция положительна почти у половины исследуемых. При рецидиве вторичной стадии сифилиса РИТ положительна почти у 90% больных. На третичной стадии развития сифилиса, при поражении внутренних органов, в том числе и нервной системы, когда реакция Вассермана даёт отрицательные результаты, реакция иммобилизации бледных трепонем положительна почти у 100% больных. На раннем этапе врождённого сифилиса реакция имеет положительный результат почти у всех больных, а на позднем этапе врождённого сифилиса - почти у 100% больных. Серопозитивный латентный сифилис подтверждается только после проведения РИТ, которую проводят после получения положительных результатов при проведении других серологических реакций. РИТ не применяют для контроля за заболеванием у больных , которые получили необходимое лечение.

Реакция иммунофлуоресценции абсорбции с бледной трепонемой (FTA-ABS) .Если реакцию проводят для больного, который болен сифилисом и не лечился, то тогда эта реакция даёт положительный результат всегда. Так же высока вероятность выявить инфекцию при помощи FTA-ABS в самом начале заболевания . Реакция обладает большой чувствительностью и специфичностью. Для диагностики латентного сифилиса и в тех случаях, когда уже было проведено несколько тестов и они показали отрицательный результат, но клиника говорит о инфицировании бледной трепонемой, в таких случаях диагноз ставят часто опираясь на результаты FTA-ABS. Буквально через неделю после того, как бледная трепонема попала в организм, начинают вырабатываться специфические антитела IgM, которые со временем перестают появляться и через 2 года уже не определяются. Для того, чтобы понять даёт ли предложенное лечение эффект, проводят специальные тесты, которые определяют специфичность этих антител. Таких тестов на сегодня есть несколько, но проведение их слишком дорого, поэтому для большинства больных эти тесты не проводят.

Гемагглютинационная реакция , которая определяет специфические антитела к бледной трепонеме (микро-РПГА). Для этой реакции в качестве антигена служат трепонемы, поэтому эта реакция очень специфична и даёт правдивые результаты в большинстве случаев.

Иммуноферментный анализ (ИФА) один из наиболее специфичных для диагностики сифилиса. На сегодня чаще всего используют непрямой вариант ИФА. Преимущества этого метода исследования очевидны: не слишком большая стоимость, лёгкость проведения, достаточна высокая точность результата, при помощи этого анализа можно выявить сифилис на ранней стадии, быстрое получение результатов.

В основе метода иммуноблотинга лежит иммуноферментный анализ, который сочетается с электрофорезом. Является одним из самых специфичных анализов и при его помощи происходит подтверждение инфицирования сифилисом.

Полимеразную цепную реакцию (специфический метод исследования) проводят для установления диагноза при скрытых течениях сифилисной инфекции. При проведении ПЦР в испытуемом материале находят возбудителя, даже на первичном этапе заболевания. Обнаруживаемый генетический материал при помощи ДНК делится и таким образом обнаружить возбудителя становится очень просто. При нейросифилисе, когда выявить инфекцию бывает очень затруднительно при проведении других анализов из-за очень низкой чувствительности, при врождённом сифилисе, при первичной стадии серонегативного сифилиса и для постановки диагноза у ВИЧ-инфицированных проведение ПЦР незаменимо. Исследование спинномозговой жидкости при сифилисе проводят, если есть клинические поражения нервной системы на ранней стадии заболевания, при скрытой форме и обязательно ещё до начала лечения. Так же этот анализ назначается для больных нейросифилисом на поздних стадиях сифилиса и при латентной форме. В клинической лаборатории проводят исследование цитоза, содержание белка, реакции Панди и Нонне - Апельта. В серологических лабораториях проводится реакция Вассермана, реакция Ланге, РИФ, РИФю,РИФц, РИТ.

Среди венерических заболеваний занимает первые позиции по распространенности. Заболевание передается от больного к здоровому преимущественно половым путем. Диагностика сифилиса – сложный, поэтапный процесс, который не всегда приносит результат.

Подозрение на сифилис – к какому врачу идти?

Большое распространение заболевание получило потому, что многие молодые люди просто не знают, как определить сифилис, какие обследования необходимо пройти. Лечением половых инфекций занимаются врачи венерологи или дерматовенерологи, так как в большинстве случаев подобные инфекции сопровождаются повреждением кожных покровов. Медики советуют с профилактической целью обследоваться каждому пациенту репродуктивного возраста. Болезнь часто протекает в скрытой форме, поэтому выявить ее можно не всегда.

Методы диагностики сифилиса

Диагностические мероприятия по выявлению заболевания основываются на клинических и лабораторных данных. Диагноз «сифилис» ставится только после получения положительных результатов лабораторного исследования. Ранняя диагностика сифилиса исключает прогрессирование заболевания. Первичный сифилис определяется исследованием отделяемого твердого шанкра эрозивных папул. Среди основных методов лабораторной диагностики сифилиса необходимо выделить:

Бактериоскопию.
Серологическое исследование (специфическое и неспецифическое).
Гистологию (при ).
Микроскопию (исследование нативного препарата, отделяемого эрозивных или язвенных высыпаний, пунктата из лимфоузла).

Микробиологическая диагностика сифилиса

Основу данного типа обследования составляет бактериоскопический метод диагностики сифилиса. Он предполагает обнаружение T.pallidum в материале, забранном из очагов воспаления:

твердый шанкр;
эрозивные нарушения;
лимфоузлы;
спинной мозг.

Предварительно врач протирает место забора материала тампоном с физраствором, затем раздражает поверхность эрозии специальной петлей, пока из нее не покажется тканевая жидкость.

При этом избегают смешивания материала с кровью. Жидкость помещается на предметное стекло. Препарат, полученный таким способом, исследуется с помощью микроскопа. Методы микробиологической диагностики сифилиса основываются на обнаружении возбудителя в материале. При отрицательном результате исследование проводят несколько дней подряд для полного исключения болезни.

Серологическая диагностика сифилиса

Для выявления и подтверждения диагноза «сифилис» в случае поздних и скрытых форм болезней основы диагностики составляет серологический метод. В большинстве случаев для диагностики сифилиса используют . Метод предполагает исследование венозной крови пациентов, которые обнаруживают антитела к антигенам возбудителя. Такой анализ на бледную трепонему помогает выявить заболевание даже при отсутствии явных клинических симптомов.

В зависимости от состава используемых для диагностики веществ, серологические методы подразделяют на:

Специфические (трепонемные).
Неспецифические (нетрепонемные).

Трепонемные тесты

Трепонемные тесты – это метод диагностики, использующий в качестве основы специфические антигены Treponemapallidum. Метод используется как для постановки, так и для подтверждения диагноза, для дифференциальной диагностики сифилиса. Все специфические тесты имеют высокую чувствительность и точные результаты. Механизмы проведения специфических тестов неодинаковы, поэтому они имеют различные показания к применению. К трепонемным тестам относят следующие методы лабораторной диагностики сифилиса:

Реакцию связывания комплемента (реакция Вассермана, РВ) с трепонемным антигеном – РСКт.
Реакцию иммобилизации бледных трепонем – РИБТ.
Реакцию иммунофлюоресценции – РИФ. Применяется в нескольких модификациях: РИФ-200 (FTA-200); РИФ-абс; РИФц – реакция иммунофлюоресценции с цельной кровью или спинномозговой жидкостью.
Реакцию пассивной гемагглютинации – РПГА.
– ИФА.
Иммуноблотинг.

Нетрепонемные тесты

Нетрепонемные тесты на сифилис используются в качестве отборочных и не подходят для окончательной диагностики, выставления диагноза. Они активно применяются для обследования больших групп населения с целью профилактических осмотров при возникновении неблагоприятной эпидемиологической ситуации. Тест обладает простотой проведения, имеет высокую чувствительность. Результат диагностики оценивается врачом. Чувствительность неспецифических тестов при ранних формах заболевания составляет около 70 %, а при вторичном сифилисе – 100 %.

К нетрепонемным тестам диагностики сифилиса относятся:

RPR (RapidPlasmaReagins).
Тест с инактивированной сывороткой – МРП (микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном).

Данные флокуляционные тесты характеризуются простотой оценки. В ходе реакции образуется комплекс «антиген + антитело», который формирует хлопья, различимые с помощью увеличительного стекла. Роль антигена в тесте выполняет кардиолипиновый антиген, который получают из сердечной мышцы быка. Связь с антигенами возбудителя сифилиса при этом отсутствует, поэтому тесты и получили название нетрепонемные.

Экспресс-диагностика сифилиса

Современные методы диагностики сифилиса предполагают выявление заболевания на ранних стадиях. В качестве метода экспресс-диагностики используется RapidPlasmaReagin(RPR). Тест направлен на определение концентрации в крови антител к возбудителю сифилиса. При заражении бледная трепонема в организме формирует защитные антитела IgG и IgM. Наличие их в образце забранной крови является косвенным доказательством присутствия в организме бледной трепонемы. Данная диагностика сифилиса помогает установить точный срок продолжительности заболевания, время инфицирования.

Анализы на сифилис – расшифровка

Современная лабораторная диагностика сифилиса основывается следующих методах:

нетрепонемный тест – RPR или VDRL;
трепонемные тесты – РИФ и РПГА.

В странах СНГ для диагностики сифилиса чаще применяют реакцию Вассермана, также реакцию иммобилизации бледных трепонем – РИБТ. Оценку полученных результатов производит только врач, который учитывает клинические проявления заболевания, стадию патологии, состояние пациента. С примерными результатами исследований можно ознакомиться в таблице ниже.ото

Дифференциальная диагностика сифилиса

Когда у врача после первичного осмотра возникает подозрение на сифилис, он направляет пациента для сдачи крови на RV. Если результаты исследования подтвердили наличие бледной трепонемы в организме, проводится дифференциальная диагностика с определением стадии заболевания. При первичном сифилисе чаще бывают положительными РИФ и ИФА, однако это не позволяет выставить диагноз «сифилис».

Диагностика вторичного сифилиса не вызывает затруднений – резким положительным является результат по всем серологическим реакциям. РИБТ положительна больше чем у 50 % больных. Третичная форма сифилиса практически не вызывает затруднений. Серологические реакции положительные в 50–90 % случаев. Диагностика скрытого серопозитивного сифилиса основывается на серологических реакциях с подтверждением результата с помощью РИБТ.

Содержание статьи

Лабораторная диагностика сифилиса

В последнее десятилетие в лабораторной диагностике сифилиса произошли значительные изменения. Такие классические тесты, как реакция связывания комплемента (реакция Вассермана), реакция Кана, цитохолевая и другие реакции преципитации утратили свою актуальность вследствие недостаточной чувствительности и большого количества неспецифических результатов. Вместо них используются во много раз более чувствительные и специфичные тесты. Внедрены молекулярно-биологические ДНК- и РНК-тесты. При интерпретации результатов тестирования используется компьютерный анализ, что исключает их субъективную оценку. Тестирование автоматизировано, методы стандартизированы, разработаны и сертифицированы различные диагностические комплексы. Это открывает широкие возможности для диагностики сложнейших случаев заболевания. В диагностике сифилиса используются:
1. Бактериоскопия.
2. Методы серологического исследования (неспецифические и специфические).
3. Исследование спинномозговой жидкости (СМЖ).
4. Гистологическое исследование - преимущественно в стадии третичного сифилиса.
5. Бактериоскопическое исследование.
6. Микроскопическое исследование нативного препарата отделяемого эрозивных или язвенных высыпаний или пунктата из лимфоузла для выявления Treponema pallidum.

Бактериоскопический метод

Получение материала и подготовка к исследованию
Материал со слизистых оболочек, кожи половых органов или экстрагенитальной области с подозрительными эрозивными или язвенными дефектами, непосредственно с поверхности твердого шанкра, широкой кондиломы, эрозивных папул получает врач лаборатории или любой другой врач в помещении, где подготовлен микроскоп с темным полем зрения. Поверхность ulcus durum или эрозивных папул протирается тампоном, смоченным в физиологическом растворе, и затем раздражается бактериологической платиновой или вольфрамовой петлей несколько минут, пока из глубоких слоев не покажется прозрачная тканевая жидкость. Необходимо следить, чтобы к ней не примешивалась кровь, в противном случае это затруднит исследование. Полученная жидкость переносится петлей на предметное стекло, куда при необходимости можно добавить физиологический раствор. Подготовленный препарат исследуется в темном поле микроскопа. Если результат негативный, исследование повторяется несколько дней подряд, а в промежутках между исследованиями применяются аппликации с физиологическим раствором.
Перед микроскопическим исследованием нельзя использовать антибиотики и местные антисептические средства!
Исследование
Полученный материал с каплей физиологического раствора, помещенный на предметное стекло и накрытый покровным стеклом, исследуется под микроскопом с помощью объектива с 40-кратным увеличением и окуляра с 10-кратным увеличением. Для микроскопического подтверждения диагноза необходимо обнаружить, по крайней мере, 2-3 морфологически типичные, живые трепонемы с характерными движениями. Отрицательный результат не исключает вероятность заболевания сифилисом, поэтому исследование необходимо повторить несколько раз. Употребление пациентом антибиотиков или местных антисептических средств является важным моментом в анамнезе.
Клиническое значение
Диагноз первичного серонегативного сифилиса может быть подтвержден только при наличии бледных трепонем. У пациентов с приобретенным или с врожденным сифилисом трепонемы обнаруживаются во всех сифилидах как раннего, так и позднего сифилиса. Интенсивность тканевой реакции обратно пропорциональна количеству этих микроорганизмов, наибольшее количество которых находится в первичной сифиломе (твердый шанкр), в региональных лимфоузлах и папулах вторичного свежего сифилиса, а наименьшее - в поздних сифилидах. У пациентов с вторичным сифилисом бледные трепонемы могут обнаруживаться во всех органах.
В циркулирующей крови трепонемы могут присутствовать кратковременно только у пациентов с вторичным свежим сифилисом и ранним врожденным сифилисом. Кровь является неблагоприятной средой для трепонем, которую они быстро покидают, мигрируя в ткани. Чрезвычайно трудно обнаружить трепонемы в цереброспинальной жидкости даже у пациентов с tabes dorsalis и прогрессивным параличом. Сперма человека является инфекционной. Моча, пот, слюна не являются контагиозными, если они не соприкасаются с мокнущими высыпаниями. Напротив, в молоке матери трепонемы обнаруживаются. У больных сифилисом трепонемы можно выявить в пунктате лимфоузлов, в селезенке и в неспецифических повреждениях (в экссудате полостных элементов различного происхождения, например, в пузырьках herpes simplex). Метод характеризуется низкой себестоимостью, ответ можно получить в течение получаса.
Возможные ошибки
Для быстрой диагностики сифилиса важно, чтобы больной не занимался самолечением. Если поверхность шанкра, кондиломы или эрозивной папулы покрыта корочкой, образовавшейся в результате вторичного инфицирования, ее следует очистить с помощью физраствора.
Раздражение поверхности элемента с целью получения тканевой жидкости необходимо выполнять очень осторожно, чтобы не вызвать кровотечение, поскольку наличие эритроцитов в микропрепарате затрудняет качественную диагностику. Исследование считается положительным только при обнаружении морфологически типичных трепонем с наличием, по крайней мере, 8 завитков и характерными движениями. Treponema pallidum необходимо дифференцировать с Т. refringens, Т. balantidis, Т. phagadenis, Т. gracilis, Т. macrodentinum, T.microdentinim.

Серодиагностика сифилиса

В выявлении и подтверждении диагноза сифилиса, особенно в случае поздних и латентных форм заболевания, когда клинические проявления ничтожны или отсутствуют, решающее значение отдается серологическим методам диагностики. Отмечены случаи, когда о заболевании сифилисом свидетельствуют только полученные специфические положительные результаты тестирования при исследовании сыворотки или плазмы.

Неспецифические (нетрепонемные) тесты

К неспецифическим (нетрепонемным) тестам, являющимся методами экспресс-диагностики сифилиса, относятся RPR (Rapid Plasma Reagins), тест с инактивированной сывороткой - МРП (микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном) и их модификации. Это так называемые флокуляционные тесты, где сформировавшийся в ходе реакции комплекс «антиген + антитело» образует хлопья, которые различимы при помощи лупы. Во всех указанных тестах в качестве антигена используется кардиолипиновый антиген, полученный из сердечной мышцы быка и не имеющий никакой связи с антигенами возбудителя сифилиса Treponema pallidum.
В диагностике сифилиса нетрепонемные тесты используются в качестве скрининговых (отборочных) и не подходят для подтверждения диагноза сифилиса. Такие тесты применяются для обследования больших групп населения во время профилактических осмотров или в эпидемиологически неблагоприятной ситуации. Тесты достаточно чувствительны, технически просты, однако требуют специально обученного персонала. Результаты тестирования должен оценивать и подтверждать врач. Для экспресс-диагностики используются преимущественно серологические тесты МРП и RPR. Чувствительность нетрепонемных тестов при ранних формах сифилиса составляет приблизительно 70%, в случае вторичного сифилиса - 100%, при латентных формах - 30%. Неспецифические тесты могут давать ложноположительные результаты в 2-2,8% случаев. У отдельных категорий пациентов, например, у беременных, это число может увеличиваться до 3-3,5%. МРП и RPR становятся позитивными через 1 -4 недели после появления шанкра, то есть через 1-1,5 месяца после инфицирования. Примерно в 2% случаев наблюдается так называемый феномен «прозоны», когда на фоне выраженной клинической картины сифилиса и положительных результатов специфических серологических реакций RPR могут не давать положительных результатов. В таких случаях положительный результат получают, разбавив образец сыворотки. При обследовании беременных, доноров, пациентов отоларингологического, неврологического и психоневрологического отделений, нетрепонемные тесты обязательно применяются в комплексе со специфическим диагностическим тестом (РПГА, ИФА).
Количественные методы (определение титра антител) МРП и RPR используются для контроля эффективности лечения.
Принцип МРП
При соединении эмульсии кардиолипинового антигена с плазмой или сывороткой больного сифилисом образуется флокулят (комплекс «антиген + антитело»), который выглядит как белые снежинки. У каждой из тест-систем (МРП, RPR) имеются свои технические особенности, однако принцип метода одинаков.
Исследуемый материал Плазма или сыворотка, используемые для анализа, должны быть прозрачными. Для тестирования не подходит хилезный или гемолизированный материал.
- Получение плазмы из капиллярной крови: кровь из пальца берут аналогично методике
определения СОЭ. В пипетку Панченко набирается 5% раствор цитрата натрия до отметки «К», а затем выливается обратно в бутылочку до отметки на пипетке «25». Оставшийся цитрат натрия сливается в пробирку для центрифуги, куда добавляют три пипетки крови из пальца пациента, набранной до отметки «К», и перемешивают. Кровь оставляют при комнатной температуре до разделения плазмы и эритроцитов. Чтобы ускорить процесс, кровь можно центрифугировать. Полученную плазму забирают пипеткой Пастера или специальной пипеткой и используют для диагностики. Для получения плазмы рекомендуется применять специальные микроветы. Материал необходимо доставить в лабораторию в течение 4-6 часов.
- Получение инактивированной сыворотки: сыворотку собирают либо при ее отделении от сгустка при отстаивании крови, либо путем центрифугирования стерильно взятой крови из вены. В холодильнике сыворотку можно хранить при температуре 4°С до 5 дней. В лаборатории полученная сыворотка инактивируется при температуре +5б°С в течение 30 мин. Тестирование выполняется на прозрачных полистироловых пластинах с углублением (МРП) или на специальных картонных пластинах (RPR).
Оценка результатов
Результаты МРП читают в проходящем свете на черной основе или над световым источником невооруженным глазом или с помощью лупы. В углублениях, где находится плазма или сыворотка больного сифилисом в различных количествах образуются белые хлопья разного размера. Если в углублении отмечаются большие хлопья или их конгломераты, и окружающая жидкость становится прозрачной, результат считается положительным (4+, 3+). Мелкие хлопья - результат слабо положительный (2+, 1+). В отрицательном случае хлопья не образуются (негативный). В сомнительных случаях (+-) следует ориентироваться по «отрицательному контролю». Если в углублении отрицательного контроля хлопья не образуются, результат оценивается как сомнительный (+-). Исследование продолжается количественным методом, путем разбавления сыворотки, поскольку необходимо исключить так называемый феномен «прозоны>, когда в неразведенном образце плазмы или сыворотке преципитат не образуется, а при его разведении возникают хлопья.
Для проведения RPR-теста используются готовые к употреблению сертифицированные реагиновые комплексы.
Количественный метод МРП, RPR используется для определения количества антител в образце исследуемой сыворотки во время и после лечения.
Возможные ошибки
Неправильное взятие крови из пальца - в капилляре находятся пузырьки, неточно фиксируется отметка на капилляре.
1. В реакции отсутствует контрольная сыворотка (также слабо положительной).
2. В готовой эмульсии неравномерная концентрация антигена по причине недостаточного перемешивания перед применением.
3. Бактериальное инфицирование рабочего раствора.
4. Несоблюдение правил хранения и изготовления плазмы, сыворотки, антигенов и их рабочего раствора.
5. Использование двухвалентного цитрата натрия вместо трехвалентного.
6. Нарушение правил использования посуды, пипеток, несоблюдение порядка исследования.
Несоблюдение упомянутых правил может давать как ложноотрицательные, так и ложноположительные результаты.

Специфические (трепонемные) тесты

С помощью специфических тестов в сыворотке больного сифилисом обнаруживаются антитела, образованные в организме к специфическим антигенам Treponema pallidum. Трепонемные тесты используются для постановки и подтверждения диагноза, а также в дифференциальной диагностике. Для специфических тестов характерны большая чувствительность и высокоспецифичные результаты. Механизмы специфических тестов не одинаковы, с их помощью можно обнаружить различные антитела, поэтому показания к их использованию различаются. Назначая эти исследования, врач должен понимать сущность каждого теста, уметь обосновать свой выбор, ориентироваться в разнообразных тестах, чтобы выбрать оптимальный вариант для постановки диагноза и соответствующего лечения, а также сделать заключение о его результатах.
К трепонемным тестам, наиболее часто используемым в диагностике относятся РПГА и И ФА.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРНА)

Принцип метода
Syphilis TPHA-Test (Treponema pallidum haemagglutination test) - реакция непрямой гемагглютинации, которую используют для выявления специфических антител к Treponema pallidum. Эритроциты барана или петуха сенсибилизируются антигеном Treponema pallidum. В присутствии антител происходит агглютинация сенсибилизированных клеток - в микролунках образуются специфические рисунки. Клеточная суспензия содержит также трепонемный экстракт Рейтера, который абсорбирует непатогенные трепонемные антитела.
Исследуемый материал
Исследуется только сыворотка. Не подходят гемолизированные и мутные образцы. Образцы можно хранить 24 часа от +2 до + 8°С, или до 4 недель при температуре - 20°С.
Характеристика метода РПГА - хороший диагностический тест, однако положительные результаты необходимо подтверждать с помощью какого-либо другого специфического теста диагностики сифилиса. В случае излеченного сифилиса результаты РПГА могут длительно оставаться положительными. Ложноположительные результаты наблюдаются в случае лепры, инфекционного мононуклеоза, а также в случае заболеваний соединительной ткани. Результаты читают через 45-60 минут.
Интерпретация результатов
Результаты оцениваются по системе «4+». - Отрицательный результат определяется тогда, когда в центре лунки с сывороткой для теста образуется ясная и четкая точка из неагглютинированных клеток с/или без очень маленького просвета в центре. Сомнительный результат определяется тогда, когда в центре точки из неагглютинированных клеток вместо маленького просвета появляется кольцо небольшой плотности на прозрачном фоне. Такие образцы необходимо тщательно проверить повторно (+/-, «1+» - сомнительный). Положительный результат определяется в том случае, когда клетки агглютинируют, образуя подобный поляне участок, вокруг которого формируется кольцо. В зависимости от его величины результат реакции оценивается соответственно «2+», «3+» или «4+».
Если в контрольной лунке теста наблюдается точка неагглютинирующих клеток, это значит, что сыворотка пригодна к тестированию.
Если в контрольной лунке теста произошла реакция, это значит, что в исследуемом образце содержатся неспецифические агглютинины. Сыворотка для тестирования непригодна и ее необходимо тщательно обработать.

Количественный метод РПГА

Для контроля эффективности лечения можно использовать количественный метод РПГА - определение титра антител. Титрование рекомендуется выполнять при резко положительных пробах, которые оценены как «4+», так как результат «4+» бывает в том случае, если титр пробы > 1:80.
Интерпретация результатов
Если в контрольной лунке гемагглютинация не происходит, то наблюдаемая гемагглютинация в лунках теста свидетельствует, что проба положительная. Титр определяется по последнему разведению, которое указывает на результат <4+»:
1. разведение в лунке 1:80
2. разведение в лунке 1:160
3. разведение в лунке 1:320 и т. д. Титровать результаты «3+» или «2+» нет необходимости.
Для исследования каждой пробы необходимо использовать также положительные и отрицательные контрольные сыворотки РПГА. Отрицательная контрольная сыворотка всегда демонстрирует выраженную точку, положительная контрольная сыворотка - гемагглютинацию «4+».
Для РПГА характерна высокая чувствительность, с ее помощью можно обнаружить очень небольшое количество антител в сыворотке. Тест после лечения негативируется очень медленно, он может показывать слабоположительные результаты многие годы после выздоровления.

Тесты иммуноферментного анализа - ИФА

Тест принадлежит к иммуноферментным тестам, которые в последнее время широко используются в мире для диагностики различных инфекционных заболеваний. В диагностику сифилиса ИФА начали внедрять в 80-е годы, когда были разработаны и сертифицированы диагностические тесты и стандартизирована методика тестирования.
В основе теста лежит непрямой метод Кунса. В сыворотке больного обнаруживаются специфические антитела. По чувствительности и специфичности тест сравним с иммунофлуоресцентными тестами. С помощью ИФА-теста можно выявить антитела всех существенных классов (IgM, IgA, IgG). Особенно ценен ИФА-тест в ранней диагностике сифилиса, поскольку он становится положительным уже в конце инкубационного периода. ИФА-тест является идеальным методом диагностики, подходящим для одновременного исследования большого числа образцов. Его рекомендуется использовать при обследовании беременных, контактных лиц, доноров и представителей групп риска. ИФА используется также как подтверждающий тест для образцов, демонстрирующих положительные результаты при использовании различных неспецифических тестов и РПГА.
Серологическую диагностику сифилиса затрудняют присутствие в крови ревматоидного фактора, других антител и перекрестные реакции с другими родственными бактериями, например, Treponema phagedenis и Borrelia burgdorferi. При использовании ИФА-теста эти факторы практически не влияют на результаты. Высокая концентрация липидов, гемолиз пробы не являются препятствиями для тестирования, как в случае большинства других тестов.
ИФА-тест позволяет определять все существенные классы антител и показывает высокую степень чувствительности на всех стадиях болезни (чувствительность теста 97-98%, специфичность - 98,5-99%). Отрицательный результат ИФА исключает сифилитическую инфекцию с большой степенью вероятности. В последние годы созданы тест-системы для определения отдельных классов антитрепонемных антител IgM-ИФА, IgG-ИФА. ИФА может оставаться положительным долгие годы даже у пролеченных пациентов, поэтому не используется как критерий выздоровления. У ИФА-тестов не наблюдается феномен «прозоны», который дает ложноотрицательные результаты при других методах тестирования, так как титр специфических антител очень высокий.
Принцип метода
1. АГ осаждают на лунках полистиролового
планшета.
2. Добавляют исследуемую сыворотку, образуется комплекс «АГ+АТ».
3. Добавляют антитела к иммуноглобулинам человека, меченные энзимом.
4. Добавляют субстрат, изменяющий цвет, и по интенсивности окраски определяют активность энзима. Цвет раствора зависит от количества антител в исследуемой пробе.
С помощью этого метода можно определить антитела IgG и IgM вместе, а также антитела класса IgM отдельно. Результаты расцениваются как «положительные» или «отрицательные».

Тесты, подтверждающие диагноз сифилиса

Иммунофлюоресцентные тесты - РИФ (FTA)
К этой группе относятся: РИФ-200, РИФ-абс (FTA-abc), IgM РИФ абс (IgM FTA-abc), РИФ ликв.
Начиная с 60-х годов XX столетия для подтверждения и дифференциальной диагностики сифилиса широко используются чувствительные и специфические иммунофлюоресцентные тесты. Антитела-иммунофлюоресцины, определяемые с помощью таких тестов, раньше всего появляются в сыворотке, поэтому тест становится положительным к концу первой недели после инфицирования. Это позволяет диагностировать сифилис, когда другие тесты (кроме ИФА) остаются отрицательными. РИФ-абс при первичном серонегативном сифилисе является положительной в 87% случаях в конце второй и начале третьей недели после появления первичного аффекта. Чтобы уменьшить количество ложноположительных результатов (РИФ-абс - 2,8-3%), рекомендуется использовать комплекс реакций - РИФ-абс + РИФ-200. Ложноположительные результаты при РИФ-200 наблюдаются примерно в 2% случаев. В случае вторичного сифилиса РИФ-абс положительна в 100%, в случае поздней формы заболевания - в 92-100%, в случае специфического поражения внутренних органов - в 94-100%. Даже после лечения сифилиса РИФ-абс очень долго дает положительные результаты, поэтому она не применяется для определения эффективности лечения, если только не используется количественный метод РИФ-абс - определение титра антител.
В последние годы все чаще используется реакция IgM РИФ-абс. В сыворотке больного IgM антитела появляются раньше остальных. Этот тест применяется в ранней диагностике, при обследовании контактных лиц, для контроля эффективности лечения, в дифференциальной диагностике рецидива и реинфекции, а также в случае врожденного сифилиса или для определения присутствия материнских антител у новорожденных.
Как известно, из-за большой молекулярной массы IgM антитела не проникают сквозь плацентарный барьер. В крови матери (больной сифилисом) циркулируют преимущественно IgG антитела, для которых плацентарный барьер не является препятствием, и которые поступают в кровяное русло ребенка. При наличии в сыворотке новоровденного IgM антител, нужно думать о заражении сифилисом. В мире до сих пор нет единого мнения о длительности циркуляции IgM антител в сыворотке больного. Большинство авторов считает, что они достигают своего максимума на 6-9 неделе, и не обнаруживаются после 18-месячного возраста. Немецкий ученый Миллер предполагает, что IgM циркулируют до исчезновения клинических симптомов, О"Нил - что IgM циркулируют в крови до 5 лет. По данным Миллера, в 60% случаев Syphilis lateens praecox IgM в сыворотке больше не обнаруживаются. Если лечение начинается рано, IgM исчезают в течение 5-6 месяцев, если лечение начинается позже - они сохраняются в течение 1-2 лет. Некоторые авторы используют реакцию IgM РИФ-абс как критерий излеченности.
Принцип метода
Исследуемая сыворотка подвергается инкубации вместе с Treponema pallidum (антиген), которая фиксируется на предметном стекле. В случае положительного результата образуется комплекс «антитело + антиген», связанный с обработанными флюоресцеинами антителами к человеческим глобулинам. Перед началом тестирования исследуемую сыворотку обрабатывают сорбентом (непатогенный экстракт Treponema Reiteri), чтобы исключить реакцию связывания неспецифических антител.
В результате получают свечение иммунных комплексов различной интенсивности, которую определяют с помощью люминесцентного микроскопа.
Оценка результатов
Исследование выполняется с помощью люминесцентного микроскопа (ртутно-кварцевая лампа с иммерсионной системой, окуляр с 4-х или 5-кратным увеличением, фильтры в зависимости от марки микроскопа). Результаты
оцениваются по интенсивности свечения иммунных комплексов.
Положительно оцениваются препараты, которые дают свечение 4+, 3+, 2+. Желто-зеленая люминесценция оценивается как 4+, ярко-зеленое свечение - 3+, бледно-зеленое свечение - 2+. При выраженности свечения 1+ реакция считается отрицательной (в препарате наблюдается фоновое окрашивание или окрашивание отсутствует - определяются только тени). Результат «2+» необходимо проконтролировать с помощью других специфических тестов.

Реакция иммобилизации бледных трепонем - РИБТ

Этот тест для диагностики сифилиса разработали в 1949 г. и предложили использовать Р. Нельсон и М. Майер. Даже в наши дни этот тест считается наиболее эффективным в диагностике сифилиса и служит эталоном в наиболее сложных случаях. РИБТ практически не дает ложноположительных результатов. В качестве антигена используется суспензия живых, вирулентных трепонем, полученных из яичек кролика через 7-9 дней после интратестикулярного заражения. Тест технически сложен, требует специально подготовленного персонала и проводится только в специализированных лабораториях. В основе метода лежит феномен, при котором образовавшийся комплекс «антиген + антитело» фиксируется на трепонемах, делая их неподвижными. Необходимо помнить, что антитела-иммобилизины появляются в сыворотке больного относительно поздно, поэтому при первичном и вторичном свежем сифилисе тест слабоположительный или отрицательный. Однако он незаменим при диагностике латентных форм сифилиса, сифилиса внутренних органов, нейросифилиса. После проведения терапии тест негативируется медленно и поэтому не используется для оценки эффективности лечения. Тест может оставаться положительным долгие годы после завершения терапии, в связи с чем используется для ретроспективной диагностики сифилиса.
Получение и обработка исследуемой сыворотки
Перед постановкой РИБТ обследуемому пациенту запрещается употреблять антибиотики. После употребления бициллина кровь для исследования на РИБТ берут не ранее, чем через месяц.
Кровь берут из вены натощак в стерильную, сухую, химически чистую пробирку или вакутейнер. Сыворотку необходимо отделить от сгустка в стерильных условиях не позднее чем через 24 часа после взятия крови. Перед исследованием сыворотку следует инактивировать при температуре 5б°С в течение 30 мин. Если одну и ту же сыворотку необходимо исследовать повторно, она инактивируется при температуре 5б°С в течение 15 мин.
Сыворотку можно хранить в холодильнике при температуре 10°С не более 15 дней. Добавление в сыворотку каких-либо консервантов недопустимо!
Вся используемая для проведения реакции посуда (пипетки, пробирки, флаконы и др.) должна быть стерильна.Тестирование проводится в стерильном боксе.
Интерпретация результатов
В темном поле зрения микроскопа определяют число неподвижных трепонем в исследуемом и контрольном препарате, выражая число неподвижных трепонем в процентах.
РИБТ считается отрицательной, если иммобилизация составляет 0-20%; сомнительной - при 21-30%, слабоположительной - при 31-50% и положительной, если иммобилизация превышает 50%. Сыворотки, давшие сомнительный или слабоположительный результат, рекомендуется исследовать повторно. Также желательно повторно провести исследование в тех случаях, когда полученные результаты РИБТ полностью не совпадают с результами других стандартных тестов для диагностики сифилиса. Такие исследуемые сыворотки заслуживают особого внимания, так как результаты РИБТ различны при подтверждении или исключении диагноза сифилиса.

Лечение сифилиса

Длительность лечения и применяемые методы
на разных стадиях сифилиса различны.
Схемы лечения больных сифилисом в разные периоды:

Превентивное лечение

- Бензатина бензилпенициллин G либо Бициллин-1 по 2,4 млн. ЕД в/м однократно или
- Бициллин-3 по 1,8 млн. ЕД либо Бициллин-5 по 1,5 млн. ЕД в/м два раза в неделю № 2 или Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 7 дней или
Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 7 или Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 7 дней.

Лечение больных первичным сифилисом

- Бензатина бензилпенициллин G по 2,4 млн. ЕД в/м 1 раз в 7 дней № 2 или
- Бициллин-1 по 2,4 млн. ЕД в/м один раз в 5 дней № 3 или
- Бициллин-3 по 1,8 млн. ЕД либо Бициллин-5 по 1,5 млн. ЕД в/м два раза в неделю № 5 или
- Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 10 или
- Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 10 дней или
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 10 дней.

Лечение больных вторичным и ранним скрытым сифилисом

- Бензатина бензилпенициллин G по 2,4 млн. ЕД в/м один раз в 7 дней № 3 или Бициллин-1 по 2,4 млн. ЕД в/м 1 раз в 5 дней № 6 или
Бициллин-3 по 1,8 млн. ЕД либо Бициллин-5 по 1,5 млн. ЕД в/м два раза в неделю № 10 или Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 20 или Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 20 дней или
Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 20 дней. У больных с давностью заболевания более 6 месяцев рекомендуется использовать бензилпенициллина новокаиновую соль, прокаин бензилпенициллин либо бензилпенициллина натриевую соль кристаллическую.

Лечение больных третичным, скрытым поздним и скрытым неуточненным сифилисом

Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 28 дней, через две недели - второй курс лечения бензилпенициллина натриевой солью кристаллической в аналогичных дозах либо одним из препаратов средней дюрантности (бензилпенициллина новокаиновая соль, прокаин бензилпенициллин) в течение 14 дней или
Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 20, через две недели - второй курс прокаин бензилпенициллина в аналогичной дозе № 10 или Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели - второй курс бензилпенициллина новокаиновой соли в аналогичной дозе в течение 14 дней.

Лечение больных с поражением внутренних органов и опорно-двигательного аппарата

Лечение больных висцеральным сифилисом рекомендовано проводить в условиях стационара - дерматовенерологического или терапевтического с учетом тяжести поражения. Лечение проводится дерматовенерологом совместно с терапевтом, назначающим сопутствующую и симптоматическую терапию.
Лечение больных ранним висцеральным сифилисом
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 20 дней или
- Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 20 дней или
Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 20.
Лечение больных поздним висцеральным сифилисом
Лечение начинается с двухнедельной подготовки антибиотиками широкого спектра действия (тетрациклин, эритромицин, доксициклин). Затем переходят к пенициллинотерапии.
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 400 тыс. ЕД в/м каждые 3 часа (8 раз в сутки) ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели - второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в той же дозе в течение 14 дней или
- Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели - второй курс бензилпенициллина новокаиновой соли в аналогичной дозе в течение 14 дней или
- Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели - второй курс прокаин бензилпенициллина в аналогичной дозе в течение 14 дней.

Лечение больных нейросифилисом

Лечение больных ранним нейросифилисом
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 10 млн. ЕД в/в капельно два раза в сутки ежедневно в течение 14 дней. Разовую дозу антибиотика разводят в 400 мл изотонического раствора натрия хлорида и вводят в/в в течение 1,5-2 ч. (растворы используются сразу после приготовления) или
Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 2-4 млн. ЕД в/в струйно 6 раз в сутки ежедневно (суточная доза 12-24 млн. ЕД) в течение 14 дней. Разовую дозу антибиотика разводят в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида и вводят в/в медленно в течение 3-5 минут в локтевую вену.
Для предотвращения реакции обострения (в виде появления или усугубления неврологической симптоматики) в первые 3 дня пенициллинотерапии можно принимать преднизолон в суточной дозе 50-60 мг (однократно утром).
Через 6 месяцев после окончания лечения проводится контрольное исследование ликвора. При отсутствии его санации курс лечения рекомендуется повторить.
Лечение больных поздним нейросифилисом
Лечение больных поздним нейросифилисом (прогрессирующим параличом, спинной сухоткой) проводится по тем же методикам, которые рекомендованы для лечения больных ранним нейросифилисом. Различие состоит в проведении двух курсов лечения вместо одного, с последующим ликворологическим контролем через 6 месяцев. При отсутствии санации ликвора проводится еще один курс лечения.
При прогрессирующем параличе и спинной сухотке наилучший эффект терапии, как правило, состоит в отсутствии прогрессирования заболевания.
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 10 млн. ЕД в/в капельно два раза в сутки ежедневно в течение 14 дней, через две недели - второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в аналогичной дозе в течение 14 дней или
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 2-4 млн. ЕД в/в струйно 6 раз в сутки ежедневно в течение 14 дней, через 2 недели - второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в аналогичной дозе в течение 14 дней. У больных прогрессирующим параличом для предотвращения обострения психотической симптоматики на фоне специфического лечения в начале терапии показано использование преднизолона.

Лечение сифилиса при указании на непереносимость препаратов пенициллина

При наличии аллергических реакций на пенициллин используются препараты резерва:
- Доксициклин по 0,1 г per os 2 раза в сутки ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 15 дней - для лечения первичного и 30 дней - для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или
- Тетрациклин по 0,5 г per os 4 раза в сутки ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 15 дней - для лечения первичного и 30 дней - для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или
- Эритромицин по 0,5 г per os 4 раза в сутки ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 15 дней - для лечения первичного и 30 дней - для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или
- Оксациллина натриевая соль или ампициллина натриевая соль по 1 млн. ЕД в/м 4 раза в сутки (каждые 6 часов) ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 14 дней - для лечения первичного и 28 дней - для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или
- Цефтриаксон по 0,5 г в/м один раз в сутки ежедневно № 5 для превентивного лечения и № 10 - для лечения первичного сифилиса; по 1,0 г в/м один раз в сутки ежедневно № 20 для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса.

Лечение нейросифилиса при указании на непереносимость препаратов пенициллина

Одним из предпочтительных препаратов резерва при нейросифилисе является доксициклин, который применяется перорально по 0,1 г 3 раза в день.
Тетрациклин и эритромицин при нейросифилисе применять не рекомендуется, так как они плохо проникают через гематоэнцефалический барьер.
Полусинтетические пенициллины - оксациллин или ампициллин - вводятся внутримышечно по 1 млн. ЕД на инъекцию (доза разводится в 5-6 мл дистиллированной воды) 4 раза в сутки. Длительность лечения - 28 дней.
Цефтриаксон хорошо проникает в органы, ткани и жидкости организма, в частности - в спинномозговую. Кроме того, он обладает высокой трепонемоцидной активностью. При раннем нейросифилисе цефтриаксон назначается по 1,0-2,0 г в/м один раз в сутки ежедневно в течение 20 дней. В тяжелых случаях (сифилитический менингоэнцефалит, острый генерализованный менингит) возможно внутривенное применение препарата и увеличение суточной дозы до 4,0. Для лечения поздних форм нейросифилиса цефтриаксон назначается по 1,0 г в/м один раза в сутки ежедневно в течение 20 дней, через 2 недели - второй курс препарата в аналогичной дозе ежедневно в течение 10 дней.

Дополнительное лечение

Дополнительное лечение показано, если:
- через год после полноценного лечения ранних форм сифилиса не произошло 4-х кратного снижения титра MP (RPR);
- имеет место замедленная негативация серологических реакций в течение двух лет без тенденции к дальнейшему снижению титров/степени позитивности теста или
- клинический/серологический рецидив. Проводится однократно или двукратно. Предпочтительно применение: Бензилпенициллина натриевой соли кристаллической по 1 млн. ЕД в/м каждые 4 часа (6 раз в сутки) ежедневно в течение 20 дней или
- Цефтриаксона по 1,0 г в/м один раз в сутки ежедневно в течение 20 дней.

Лечение детей

Специфическое лечение детей, больных ранним врожденным сифилисом
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая из расчета 100 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м, разделенных на 6 инъекций (каждые 4 часа), ежедневно в течение 14 дней или
- Прокаин бензилпенициллин из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м один раз в сутки ежедневно в течение 14 дней или
- Бензилпенициллина новокаиновая соль из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м, разделенных на две инъекции (каждые 12 часов), ежедневно в течение 14 дней.
Специфическое лечение детей, больных поздним врожденным сифилисом
Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы
тела в сутки в/м, разделенных на 6 инъекций (каждые 4 часа), ежедневно в течение 28 дней; через две недели - второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в аналогичной дозе в течение 14 дней или
- Прокаин бензилпенициллин из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м один раз в сутки ежедневно в течение 28 дней, через две недели - второй курс прокаин бензилпенициллина в аналогичной дозе в течение 14 дней или
- Бензилпенициллина новокаиновая соль из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м, разделенных на две инъекции (каждые 12 часов), в течение 28 дней; через две недели - второй курс бензилпенициллина новокаиновой соли в аналогичной дозе в течение 14 дней.

Профилактические мероприятия при сифилисе

Антенатальная профилактика
1. Коррекция полового поведения.
2. Полноценное обследование беременных: сбор анамнеза, клиническое и серологическое исследование в первой и второй половине беременности.
3. Своевременная диагностика и лечение сифилиса у беременных.
Постнатальная профилактика
1. Тщательное обследование новорожденного (до 3-х месячного возраста).
2. Профилактическая терапия - если женщина заранее не получала полноценного лечения, не стоит на учете или не получала профилактику во время беременности.